Unidad de Diagnóstico Genético del IIER - IIER

Diagnóstico genético

Diagnóstico Retinoblastoma

El retinoblastoma es un tumor que afecta a la retina cuyo origen es la presencia de mutaciones en un gen denominado retinoblastoma (RB1). En un 40% de los pacientes, estas mutaciones están presentes en la línea germinal lo que da lugar a una probabilidad muy elevada de desarrollar la enfermedad (en la mayoría de los casos mayor del 90%) y una probabilidad del 50% de transmitir la mutación a su descendencia. Por esta razón, es aconsejable realizar un estudio genético en todos los pacientes diagnosticados de retinoblastoma, y en sus familiares cuando los resultados del análisis genético así lo aconsejen. Este estudio va a permitir:

- Identificar aquellos pacientes portadores de una mutación que les ha predispuesto al desarrollo de esta enfermedad y la probabilidad de transmisión de la mutación a su descendencia.

- En los casos de retinoblastoma familiar (más de un miembro afectado en la misma familia), el estudio genético permite determinar qué individuos son portadores de una mutación y cuáles no. Esto permite identificar los individuos que tienen riesgo de desarrollar el tumor, aumentando la probabilidad de detección precoz. Por otro lado, elimina la necesidad de efectuar los repetidos exámenes oftalmológicos bajo anestesia en aquellos niños no portadores de la mutación lo que aporta un beneficio para los pacientes y el consiguiente ahorro económico para el hospital.

El servicio Cuenta con la acreditación ENAC UNE-EN ISO15189 para la realización de estudios genéticos de retinoblastoma.

Estudios genéticos

Secuenciación gen RB1 (Acreditación UNE-EN ISO 15189)
Análisis de MLPA: Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (Acreditación UNE-EN ISO 15189)
Panel de RB1 (NGS)

Documentación para realización de estudio

Guía estudio genético Retinoblastoma
Guía para envío de muestras
Hoja de solicitud estudio genético Retinoblastoma
PLAZOS DE RESPUESTA RESULTADOS
Información al paciente y consentimientos informados adultos
Información al paciente y consentimientos informados menores
Oferta de Servicios y Listado de precios
Certificado de acreditación ENAC (UNE-EN ISO 15189)
Anexo Técnico ACREDITACIÓN Nº 1032/LE2075
Certificado EMQN

Diagnóstico Déficit de alfa-1 antitripsina

El Déficit de Alpha-1-Antitripsina (DA1AT) es una enfermedad genética que se caracteriza por concentraciones plasmáticas anormalmente bajas de A1AT, lo que confiere una predisposición para desarrollar principalmente enfisema pulmonar y diversos tipos de enfermedades hepáticas (incluyendo colestasis neonatal, hepatitis juvenil, cirrosis hepática en niños y adultos, y carcinoma hepatocelular). Aunque con menor frecuencia se asocia también con enfermedades de la piel como paniculitis y vasculitis. Mientras que la enfermedad hepática está relacionada con la acumulación intrahepática de polímeros, el desarrollo de enfisema se favorece por concentraciones plasmáticas bajas de A1AT, insuficientes para proteger el tejido conectivo del pulmón de los efectos destructivos de las proteasas.

Existen un gran número de variantes del gen Serpina 1 que codifica para la proteína A1AT, aunque las alteraciones más comunes asociadas con niveles reducidos de A1AT son las variantes PiS y PiZ. El estudio genético de los pacientes se realiza mediante la identificación de estas dos variantes, que son las más frecuentes en nuestra población. Para la identificación de otras variantes raras se realizan análisis de secuenciación de los exones codificantes del gen Serpina 1.

Estudios genéticos:

PCR alelo específica (S/Z)
Secuenciación gen Serpina 1

Documentación para realización de estudio:

Hoja de información al paciente y Consentimiento Informado
Oferta de servicios y listado de precios
Hoja de solicitud estudio DAAT
Hoja de solicitud estudio Hospital Clínico (canalización)

Diagnóstico genético de Epidermólisis Bullosa

La epidermolisis ampollosa o bullosa (EB), engloba un grupo heterogéneo de enfermedades raras, hereditarias de la piel. Se caracteriza por una erupción de ampollas en la piel de forma espontánea o por traumatismos mínimos. Este incremento de la fragilidad de la piel se debe a mutaciones en genes que codifican varias proteínas estructurales, intra o extracelulares, responsables de mantener la resistencia mecánica del tejido en las regiones en donde se encuentran.

Se conocen tres formas clínicas principales, dependiendo del lugar donde aparezca la alteración estructural y del nivel epidérmico donde aparece la ampolla o vesícula: la EB simple (localizada en las células basales de la epidermis), la EB juntural (localizada en la lámina lúcida) y al EB distrófica (localizada en la dermis debajo de la lámina densa a nivel de las fibras de anclaje).

Cada subtipo de EB es consecuencia de mutaciones en los genes que codifican para proteínas distintas, cada una de las cuales íntimamente implicada en el mantenimiento de la estabilidad estructural de los queratinocitos o en la adhesión de los queratinocitos a la dermis subyacente. La EB se hereda de forma autosómica dominante o recesiva, dependiendo del tipo o subtipo de enfermedad.

En el SDG del IIER se realiza el estudio genético de EB mediante la aplicación de técnicas de secuenciación masiva (NGS) y análisis de exoma dirigido a los genes relacionados con el desarrollo de la enfermedad.

El diagnóstico y la subclasificación de la EB son importantes ya que permiten:

Un pronóstico temprano de la gravedad de la enfermedad.
Toma de decisiones para el manejo del paciente.
El asesoramiento genético del paciente y su familia, y el diagnóstico genético prenatal o preimplantacional.
Su posible inclusión en ensayos clínicos.
Medicina de precisión.

Estudios genéticos:

Secuenciación de exoma (NGS)
Documentación para realización de estudio:
Guia para envío de Muestras de Epidemiolisis Bullosa
Hoja de solicitud del Estudio Genético de Epidemiolisis Bullos Ngs

Diagnóstico Programa Casos No Diagnosticados (SpainUDP)

Los pacientes con enfermedades raras (ER) sin diagnóstico pueden beneficiarse en gran medida de los avances en el campo de las técnicas de secuenciación masiva de última generación. Aunque la secuenciación de genes aislados o de paneles de genes tiene un alto valor diagnóstico para muchas enfermedades de origen genético, la secuenciación del exoma completo presenta un mayor porcentaje de éxito y se hace necesaria en el caso de pacientes que presentan síndromes complejos sin diagnóstico.

Los pacientes que se estudian pertenecen al Programa de Casos Sin Diagnóstico SpainUDP y están registrados como "sin diagnóstico" en el Registro Nacional de Enfermedades Raras. Asimismo, las muestras de sangre y ADN de estos pacientes y sus familiares se almacenan en el Biobanco Nacional de Enfermedades Raras (BioNER). Los cuadros clínicos que padecen estos pacientes pueden tener un origen genético, por lo que la secuenciación del exoma completo puede conducir a la identificación del gen/genes causantes de dichos cuadros. En el supuesto de que tras realizar la secuenciación del exoma no se obtuvieran genes candidatos claros, la compartición de datos fenotípicos y genotípicos en redes internacionales de casos sin diagnóstico puede ser una vía complementaria para lograr el diagnóstico de los pacientes.

Estudios genéticos

Exomas del probando y padres

Diagnóstico de tumores de ovario de células de la granulosa

El cáncer de la granulosa ovárica representa el 3-5% de los cánceres de ovario, estando clasificado como una enfermedad rara (Orphanet ID: ORPHA99915) [1]. Sus características patológicas y moleculares lo diferencian claramente del tipo más frecuente, el cáncer epitelial, convirtiendo a esta enfermedad en una entidad única. Aunque suelen detectarse en etapas tempranas, donde la cirugía es curativa en un alto porcentaje de casos, se ha descrito una tasa de recurrencia del 10-28% con una media de tiempo a la recidiva de 2 años y medio.

Los tumores ováricos de células de la granulosa son relativamente homogéneos, lo cual hace probable que deriven de un set pequeño de alteraciones moleculares [2]. En concreto, un estudio de secuenciación masiva de ARN de estos tumores permitió descubrir que la mutación puntual (402C>G) en el gen Forkhead box L2 (FOXL2) está presente en el 95% de los casos [3]. Esta alteración es exclusiva y patognomónica, por lo que podría considerarse un tumor con un origen "monomutacional".

FOXL2 es un factor de transcripción altamente conservado que sólo se expresa en los párpados en desarrollo y en las células de la granulosa ovárica [4]. De forma fisiológica FOXL2 está implicado en el crecimiento y diferenciación de las células de la granulosa ovárica [5-6]. Se ha descrito que la versión mutada de FOXL2, al contrario que la "wild type", induce propiedades pro-malignas a distintos tipos de líneas celulares humanas [7-8].

A pesar de conocerse poco acerca de los mecanismos por los cuales FOXL2 mutado induce la progresión tumoral uno de los equipos de nuestro centro (Unidad de Terapia Génica del IIER) trabaja activamente en la búsqueda de estrategias terapéuticas que permitan actuar de forma específica contra los tumores de granulosa ovárica portadores de la mutación FOXL2-402C>G. Por lo tanto, es de potencial interés conocer si las mujeres que padecen de esta enfermedad presentan esta mutación.

Secuenciación región génica en la que aparece la mutación 402C>G.

JCO, 2003, 21:1180-9.
Endocrine Reviews (2012) 33:109-144
N Engl J Med. 2009 Jun 25;360(26):2719-29
Journal of medical genetics (2002). 39:916-921.
Hum Mol Genet 2005;14:2053–62.
Development 2004;131:933–42.
Oncogene 2011;30:1653–63.
PLoS One 2013;8:e55099.

Lidia Mirela Mielu

Técnico Especializado de OPIS. Colaboradora I+D+I

ORCID code: 0000-0002-3205-7277
Esther Hernández San Miguel

Técnico Especializado de OPIS. Colaboradora I+D+I

ORCID code: 0000-0003-4135-860x
Beatriz Baladrón Jimenez

Técnico Especializado de OPIS. Colaboradora I+D+I

ORCID code: 0000-0002-5461-4652
Daniel Rivera Pinto

Técnico Especializado de OPIS. Colaborador I+D+I

ORCID code: 0000-0001-7489-7197
Maria Victoria Moneo Ocaña

Titulado Técnico Nivel 3

ORCID code: 0009-0005-4017-7542
Marta Fernández Prieto

Técnico Especializado de OPIS. Colaboradora I+D+I

ORCID code: 0000-0003-3034-5723
Gema Gómez Mariano

Científico Titular (OPIS)

ORCID code: 0000-0003-0682-5276
Sheila Ramos Del Saz

Técnico Superior de Laboratorio (M1)

ORCID code: 0000-0002-4831-0353
Beatriz Martinez-Delgado

Investigador Científico (OPIS)

ORCID code: 0000-0001-6834-350X
Lidia López-Jiménez

Técnico Titulado Superior

ORCID code: 0000-0002-4109-3034

List of staff

El Área de Genética Humana (AGH) adscrita al Instituto de Investigación en Enfermedades Raras, cuenta con un Servicio de Diagnóstico Genético en el que se ofertan servicios para el diagnóstico de diferentes enfermedades genéticas. El AGH aporta experiencia en numerosas técnicas de secuenciación masiva y análisis de datos de gran proyección en la recién iniciada era post-genómica.

RETINOBLASTOMA

DÉFICIT DE ALFA 1 ANTITRIPSINA

EPIDERMÓLISIS BULLOSA

PROGRAMA CASOS NO DIAGNÓSTICADOS (SpainUDP)

TUMORES DE OVARIO DE CÉLULAS DE LA GRANULOSA

Beatriz Martínez Delgado Gema Gómez Mariano

bmartinezd@isciii.es ggomezm@isciii.es

Telf: 91 8223152 Telf: 91 8223101

Recursos del IIER

Diagnóstico genético

Diagnóstico Retinoblastoma

Diagnóstico Déficit de alfa-1 antitripsina

Diagnóstico genético de Epidermólisis Bullosa

Diagnóstico Programa Casos No Diagnosticados (SpainUDP)

Diagnóstico de tumores de ovario de células de la granulosa

Lidia Mirela Mielu

Esther Hernández San Miguel

Beatriz Baladrón Jimenez

Daniel Rivera Pinto

Maria Victoria Moneo Ocaña

Marta Fernández Prieto

Gema Gómez Mariano

Sheila Ramos Del Saz

Beatriz Martinez-Delgado

Lidia López-Jiménez